PG电子致力于生物医疗领域,特别是在小鼠谷氨酰胺合成酶(GS)检测方面,推出了一款高效的试剂盒。该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA),用于定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中的小鼠谷氨酰胺合成酶(GS)。
实验原理
在预先包被的小鼠谷氨酰胺合成酶(GS)捕获抗体微孔中,依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体,进行温育并彻底洗涤。通过底物TMB的显色反应,最终形成的颜色深浅与样品中的小鼠谷氨酰胺合成酶(GS)呈正相关。然后,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),以计算样品浓度。本试剂盒仅供体外研究使用, 不得用于临床诊断。
样本处理及要求
1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后以1000×g离心20分钟,取上清即可,或可将上清置于-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
2. 血浆:使用EDTA或肝素作为抗凝剂进行标本采集,并在采集后的30分钟内于2-8℃以1000×g离心15分钟,取上清即可进行检测,或可将上清置于-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎,按1:9的比例与PBS混合,进行充分研磨。如有需要,可对匀浆液进行超声破碎或反复冻融处理。经过5000×g离心5~10分钟后取上清进行检测。
4. 细胞培养物上清或其他生物标本:同样采用1000×g离心20分钟,取上清即可进行检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
试剂准备及操作步骤
试剂盒应从冷藏环境中取出后,待室温平衡方可使用。稀释20×洗涤缓冲液需用蒸馏水按1:20稀释。
操作步骤如下:
- 从平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需的板条,其余部分用自封袋密封并放回4℃。
- 设定标准品孔和样本孔,各加不同浓度的标准品50μL。
- 在样本孔中加入待测样本50μL,空白孔不加。
- 向每个标准品孔和样本孔中(除空白孔外)加入HRP标记的检测抗体100μL,覆盖反应孔并在37℃水浴或恒温箱中温育60分钟。
- 弃去液体,加满洗涤液(350μL),静置1分钟,甩去洗涤液,重复此过程5次。
- 每孔加入底物A和B各50μL,避光孵育15分钟。
- 每孔加入终止液50μL,并在15分钟内测定各孔的OD值,波长为450nm。
实验结果计算及注意事项
通过测得的标准品OD值绘制标准曲线,以获得直线回归方程。样本的OD值代入方程,计算出样品浓度。
注意事项包括:
- 严格控制温育时间和温度,确保所有试剂使用前均已达到室温。
- 确保洗板过程正确,避免孔内液体残留,防止结果不准确。
- 应避免试剂和样本的交叉污染,确保实验的准确性。
本试剂盒的性能
PG电子的试剂盒拥有广泛检测范围(25pg/mL–800pg/mL),高灵敏度(低于10pg/mL的检测浓度),及出色的重复性,确保您在进行小鼠谷氨酰胺合成酶(GS)的检测时获得可靠的结果。
通过PG电子的创新产品与优质服务,我们旨在为生物医疗领域的科研工作者提供更可靠的工具,助力生命科学的探索与发展。