产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理而开发的检测试剂盒，具有以下显著特点：

1. 即开即用

用户仅需提供样品DNA模板，其他组成部分均已准备就绪。

2. 高灵敏度

经过优化的引物等组分，确保了检测试剂盒的高灵敏度。

3. 提供阳性对照

附带的阳性对照有助于快速区分假阴性样品，提高检测的可靠性。

4. 高特异性

引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本的DNA交叉反应，为结果提供更高的准确性。

5. 适用性广

本试剂盒不仅可用于定性检测，还可进行定量检测，定量检测的线性范围至少达到5个数量级。

6. 使用次数充足

本产品可支持进行50次20μL探针法荧光定量PCR反应，极具性价比。

7. 仅限科研使用

此产品仅供科研用途，不适用于临床诊断。

方法步骤

第一步：DNA提取

选用适合的方式提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

第二步：稀释标准曲线样品

（注意：由于阳性对照浓度较高，应在独立区域进行稀释，以避免污染样品或本试剂盒的其他成分。）

1. 标记6个离心管，分别标记为7、6、5、4、3、2。
2. 每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL的1×10⁸拷贝/μL阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
4. 用更换枪头，在6号管中加入5μL的1×10⁷拷贝/μL阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
5. 重复以上操作，直到得到6个不同稀释度的标准曲线样品。

如无需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

第三步：试剂配制

若有N个待检样品，请准备N+2个qPCR管，并向各PCR管中添加所需成分（详见说明书）。

第四步：添加模板

向qPCR管中分别加入2μL模板，按顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

第五步：扩增反应

将PCR管放入PCR扩增仪器的样品槽，进行扩增，具体扩增程序详见说明书。

第六步：结果分析

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，进而推算待测样品的DNA浓度。
2. 若未制作标准曲线，根据以下标准判定结果：
   • 阳性对照结果：Ct值<30，显示明显的指数增长，呈现典型的S型曲线。
   • 阴性对照结果：Ct值38或无Ct值，无明显的指数增长及平台期。
   • 样本检测结果：Ct值<35，显示样本中含有婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值在35-38之间，需进行复检。

运输及保存：低温运输至-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照应单独放置，以免污染其他试剂。

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