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甘油菌种复苏与保藏PG电子步骤

发布时间:2025-02-23   信息来源:魏睿紫

菌种保藏(culture preservation,culture collection)是维护微生物菌株活力和遗传特性的关键技术,尤其在生物医疗研究中尤为重要。经过基因编辑或改造的细菌菌种通常极为珍贵且数量有限,因此其保藏工作必须小心谨慎。下面介绍具体的操作步骤:

甘油菌种复苏与保藏PG电子步骤

菌种保藏的过程包括将待保存的菌液与已配好的甘油混合液按1:1比例混合,最终达到20%甘油的浓度。首先,需要准备40%(v/v)甘油与灭菌水的混合液。接着,取出2ml的离心管或保菌管,加入500微升的40%甘油-水混合液。使用移液枪吸取500微升的菌液,确保枪头深入液面以下缓慢加入。最后,将离心管或保菌管放置于-80℃冰箱中进行保存。同时,在保菌管上标明日期、菌种及抗性等详细信息,以便于日后的识别。

菌液复苏是保存后的关键步骤,使得菌液可用于后续实验。具体操作时需准备含有抗性的LB培养基,每个培养管装入约八毫升,这一过程必须在无菌操作台上进行,以避免污染。向每管中加入100微升的菌液,置于37℃下,180rpm摇动12小时以培养菌种。

在氨苄抗性的配置方面,需将1g氨苄青霉素钠溶解于10ml的灭菌水中,过滤后可于-20℃保存。LB培养基的配置则为10g氯化钠、10g胰蛋白胨及5g酵母提取物溶于一升的溶液中,均分装入250ml的锥形瓶,每瓶装100ml。为LB培养基加入氨苄抗性时,每100ml培养基中添加100微升氨苄抗性。

通过这一系列简便的步骤,您可以有效地保存和复苏珍贵的菌种,确保为生物医疗领域的后续研究提供坚实的基础。这正是PG电子所提倡的科研精神,助力科研人员在微生物领域不断创新与突破。